Расшифровка фенотипирования лимфоцитов

Расшифровка фенотипирования лимфоцитов

Рецептор клеточный (receptor) [лат. receptor — принимающий] — белковые молекулы или молекулярные комплексы, расположенные на поверхности клетки или внутри ее, которые способны специфически связывать другие молекулы, несущие внешние для клетки регуляторные сигналы (напр., гормоны, нейромедиаторы, факторы роста, лимфокины, лекарство и т. п.), или реагировать на физические факторы (напр., свет).

Рецептор – особый маркер, молекула, которая позволяет отличить один лимфоцит от другого. Под микроскопом они все выглядят одинаково, но функции их различны. Лимфоциты облеплены тысячами разных рецепторов, истинная функция многих их них до сих пор не известна. И только лабораторными методами можно дифференцировать один лимфоцит от другого и подсчитать количество отдельных популяций.

В нашем случае речь идет о рецепторах лимфоцитов, по которым можно отнести их к определенному виду. При исследовании клеточного иммунитета определяют ко-рецепторы, которые дополняют основные рецепторы, и служат для усиления межклеточного взаимодействия и более точного распознавания антигена. Эти маркеры не ключевые, они не имеют решающего значения в распознавании и иммунном ответе, а используются лишь для идентификации. Уникальный для каждого вида лимфоцита ко-рецептор и есть та визитная карточка, по которой отличают, например, Т-Хелпер от Т-Киллера.

Знаки «+» и «–» здесь не для сложения и вычитания, а для маркировки лимфоцитов. В данном случае они обозначают наличие рецептора на поверхности. Знак плюс «+» показывает, что рецептор на поверхности присутствует, знак «-», что этого рецептора нет или он слабо выражен. Знаки ставятся после кластера дифференцировки CD, служащего для обозначения рецептора, которому присвоен определенный порядковый номер. Например, полное обозначение Т-хелпера CD3+CD4+CD8-CD45+ где

CD3+ рецептор для всех Т-лимфоцитов
CD4+ рецептор Т-хелпера
CD8- знак «-» означает что этого рецептора нет (в данном случае это рецептор Т-цитотоксического лимфоцита)
CD45+ общий антиген для всех лейкоцитов

Примечание. Например, Т-хелпер может обозначаться разными способами в разных лабораториях.

CD3+CD4+CD8-CD45+
CD3+CD4+CD45+
CD3+CD4+
CD4+
CD4
без плюса

Все это будет один и тот же Т-хелпер. Только в первом случае, анализ будет количественно более точный из-за дополнительных поясняющих рецепторов. Такую запись используют не для красоты, в идеале это должно означать, что во время анализа применяли дополнительные моноклональные антитела для идентификации. Дело в том, что многие маркеры могут одновременно присутствовать на разных типах лейкоцитов, поэтому для более точного результата и разделения применяют фенотитирование несколькими антигенами одновременно.

Так, если ранее для определения Т-цитотоксических лимфоцитов считалось достаточным использовать только один маркер – CD8, то согласно современным представлениям необходимо одновременное исследование четырех маркеров: CD8, CD4, CD3 и CD45. Реализация такого подхода возможна только при использовании многоцветного цитофлюориметрического анализа.
https://www.ramld.ru/userfiles/file/Laboratory medicine 12/HaydukovLM12.pdf

Из-за изменчивости рецепторов на разных стадиях созревания, или при определенных условиях, или месте расположения выделяют 3 формы их экспрессии. Записывается это в таком виде — hi, mid, low(или bright, mid, dim), что в переводе на русский язык означает высокую, среднюю и низкую экспрессию и плотность рецепторов. Экспрессирует – это значит выбрасывает и выставляет на свою мембрану рецепторы изнутри клетки. Встречается такое обозначение не часто в нашем случае. Например, в отношении натуральных киллеров можно столкнуться с такой записью:

CD16brightCD56dim (CD16+CD56-) – популяция, которая составляет 90% и содержаться в периферической крови, в красной пульпе селезенки. Она имеет высокую плотность рецепторов CD16 и низкую CD56.

CD16dimCD56bright (CD16-CD56+) — локализуются в печени, эндометрии, в децидуальной оболочке, в периферической крови их количество минимально — не более 10%. У этих NK-клеток наоборот высокая плотность CD56 и низкая CD16.

Все лимфоциты можно разделить на 3 основные группы:

1) Т-лимфоциты CD3+CD19-CD45+ делятся на:

* Т-хелперы CD3+CD4+CD8-CD45+
— Т-хелперы наивные CD4+CD45RA+CD45R0-CD45+
— Т-хелперы активированные/памяти CD4+CD45R0+CD45RA±CD45+

* Т-цитотоксические CD3+CD8+CD4-CD45+
* Т-регуляторные CD4+CD25brightCD127negCD45+
* Гамма-дельта Т-клетки CD3+γδТcR+αβТсR-CD45+
* T-NK-клетками CD3+CD16+CD56+CD45+ (особая популяция, которую можно одновременно отнести и к Т и NK-клеткам)

2) В-лимфоциты CD3-CD19+CD45+ делятся на:

* B-1 клетки CD19+CD5+CD27-CD45+
* B-2 клетки CD19+CD5-CD27-CD45+ (обычные, знакомые всем В-лимфоциты)
* В-клетки памяти CD19+CD5-CD27+CD45+

3) NK-лимфоциты CD3-CD16+CD56+CD45+ делятся на:

* NK-клетки цитолитические CD3-CD16+CD56dimCD45+
* NK-клетки цитокин-продуцирующиеCD3-CD16-CD56brightCD45+

Возможные формы записи натуральных киллеров:

CD3-CD16+CD56+CD45+ киллеры с обоими рецепторами CD16 и CD56 сразу
CD3-CD16+CD56-CD45+ цитолитические киллеры с рецептором CD16
CD3-CD16-CD56+CD45+ цитокин-продуцирующиекиллеры с рецептором CD56

Или так, по отдельности:
CD3-CD16+CD45+
CD3-CD56+CD45+

Или вот так вместе:
CD3-(CD16+CD56)+

Разницы нет. Но общая норма NK-клеток – это сумма обоих рецепторов CD16 и CD56.

Внимание! Не путать NK-лимфоциты с T-NK-клетками, фенотип которых CD3+CD16+CD56+. Это особая популяция, которая несет одновременно и рецептор CD3 Т-клеток и рецепторы CD16/56 натуральных киллеров. У истинных NK-клеток CD3 рецептор стоит со знаком минус «-», это значит что эти клетки его не имеют.

Повторюсь, что далеко не во всех лабораториях в анализах клеточного иммунитета расписывают полный набор всех поверхностных антигенов. В большинстве случаев ограничиваются записью в таком виде CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ и т. д. Значит и проверка шла по одному рецептору. Хотя, использование CD45 и для локализации всей популяции лимфоцитов и др. антигенов является более корректным.

В обычном устаревшем классическом варианте фенотипирование выглядит так:

1) Т-лимфоциты CD3+ делятся на:
* Т-хелперы CD3+CD4+
* Т-киллеры CD3+CD8+
2) В-лимфоциты CD19+
3) NK-лимфоциты CD16+CD56+